タンパク質の発現を増加させるための塩基修飾されたＲＮＡ
本発明は、タンパク質の発現を増加させるための、および、例えば遺伝子治療において腫瘍および癌疾患、心臓および循環器系統の病気、感染症、自己免疫疾患、または単一遺伝子疾患の治療に用いる薬学的組成物、特にワクチンの調製のための、塩基修飾されたＲＮＡとその使用を提供する。さらに、本発明は、インビトロ転写法、塩基修飾されたＲＮＡを用いてタンパク質の発現を増加させるためのインビトロでの方法、および、インビボでの方法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質の発現を増加させるための、塩基修飾されたＲＮＡ配列の使用であって、該塩基修飾されたＲＮＡ配列は、少なくとも１つの塩基修飾を含み、かつ少なくとも１つのタンパク質をコードする、使用。
【請求項２】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、一本鎖または二本鎖であり、線状または環状であり、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはｍＲＮＡの形態である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
上記塩基修飾されたＲＮＡがｍＲＮＡである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
上記塩基修飾されたＲＮＡは、組換えによって、または、天然に産生されるタンパク質の群より選択されるタンパク質の少なくとも１つをコードし、該タンパク質の群は、成長ホルモンまたは成長因子；代謝および／または造血に影響するタンパク質；血液凝固系のタンパク質；［ベータ］−ガラクトシダーゼ（ｌａｃＺ）；ＤＮＡ制限酵素；リゾチーム；プロテアーゼ；細胞の信号伝達を刺激するタンパク質；アポトーシス因子またはアポトーシスと関連または結合するタンパク質；腫瘍特異性表面抗原（ＴＳＳＡ）を含む抗原；ＮＹ−Ｅｓｏ−１またはＮＹ−Ｅｓｏ−Ｂを含む配列；上記タンパク質のうちの１つに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有するタンパク質またはタンパク質配列からなり、
上記成長ホルモンまたは成長因子は、ＴＧＦα、ＩＧＦ（インスリン様増殖因子）を含み、
上記代謝および／または造血に影響するタンパク質は、α−アンチトリプシン、ＬＤＬ受容体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インシュリン、ＧＡＴＡ−１を含み、
上記血液凝固系のタンパク質は、第８因子、第６因子等であり、
上記ＤＮＡ制限酵素は、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩを含み、
上記プロテアーゼは、パパイン、ブロメライン、ケラチナーゼ、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、レニン（キモシン）、Ｓｕｉｚｙｍｅ、Ｎｏｒｔａｓｅを含み、
上記細胞の信号伝達を刺激するタンパク質は、４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）と保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）とを含むクラスＩサイトカインファミリーのサイトカイン、４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）を含んでいるが保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）を含んでいないクラスＩＩサイトカインファミリー、腫瘍壊死ファミリーのサイトカイン、７つの膜貫通ヘリックスを含みかつＧ−タンパク質と相互作用するケモカインファミリーのサイトカインを含み、
上記４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）と保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）とを含むクラスＩサイトカインファミリーのサイトカインは、ＩＬ−３；ＩＬ−５；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２を含むＩＬ−６サブファミリー；ＩＬ−２、ＩＬ−４ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５を含むＩＬ−２サブファミリー；サイトカインＩＬ−１α；ＩＬ−１β；ＩＬ−１０を含み、
上記４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）を含んでいるが保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）を含んでいないクラスＩＩサイトカインファミリー（インターフェロン受容体ファミリー）のサイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γを含み、
上記腫瘍壊死ファミリーのサイトカインは、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＣＤ４０、Ｆａｓを含み、
上記７つの膜貫通ヘリックスを含みかつＧ−タンパク質と相互作用するケモカインファミリーのサイトカインは、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１、ランテス、ＣＣＲ５、ＣＸＲ４を含み、
上記アポトーシス因子またはアポトーシスと関連または結合するタンパク質は、ＡＩＦ、Ａｐａｆ、ＡＰＯ−２（Ｌ）、ＡＰＯ−３（Ｌ）、アポパイン、Ｂａｄ、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ｘＳ、ｂｉｋ、ＣＡＤ、カルパイン、カスパーゼ、ｃｅｄ−３、ｃｅｄ−９、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ｃｒｍ Ａ、シトクロムＣ、ＣｄＲ１、ＤｃＲ１、ＤＤ、ＤＥＤ、ＤＩＳＣ、ＤＮＡ−ＰＫＣＳ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＦＡＤＤ／ＭＯＲＴ−１、ＦＡＫ、Ｆａｓ（ＦａｓリガンドＣＤ９５／ｆａｓ（受容体））、ＦＬＩＣＥ／ＭＡＣＨ、ＦＬＩＰ、ホドリン、ｆｏｓ、Ｇ―アクチン、ガス−２、ゲルゾリン、グランザイムＡ／Ｂ、ＩＣＡＤ、ＩＣＥ、ＪＮＫ、ラミンＡ／Ｂ、ＭＡＰ、ＭＣＬ−１、Ｍｄｍ−２、ＭＥＫＫ−１、ＭＯＲＴ−１、ＮＥＤＤ、ＮＦ−ｋＢ、ＮｕＭａ、ｐ５３、ＰＡＫ−２、ＰＡＲＰ、パーフォリン、ＰＩＴＳＬＲＥ、ＰＫＣσ、ｐＲｂ、プレセニリン、ｐｒＩＣＥ、ＲＡＩＤＤ、Ｒａｓ、ＲＩＰ、スフィンゴミエリナーゼ、単純ヘルぺス由来のチミジンキナーゼ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、トランスグルタミナーゼを含み、
上記Ａｐａｆは、例えばＡｐａｆ−１、Ａｐａｆ−２、Ａｐａｆ−３であり、
上記カスパーゼは、例えば、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１であり、
上記腫瘍特異性表面抗原（ＴＳＳＡ）を含む抗原は、５Ｔ４、α５β１−インテグリン、７０７−ＡＰ、ＡＦＰ、ＡＲＴ−４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、β−カテニン／ｍ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン／ｍ、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ＣＴ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ−２／ｎｅｗ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＡＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、ミオシン／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＭ−１、−２、−３、ＮＡ８８−Ａ、ＰＡＰ、プロテイナーゼ−３、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ−ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、サバイビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１を含む、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
上記塩基修飾されたＲＮＡは、２−アミノ６−クロロプリンリボシド−５'−三リン酸塩、２−アミノアデノシン５'−三リン酸塩、２−チオシチジン−５'−三リン酸塩、２−チオウリジン５'−三リン酸塩、４−チオウリジン５'−三リン酸塩、５−アミノアリルシチジン−５'−三リン酸塩、５−アミノアリルウリジン−５'−三リン酸塩、５−ブロモシチジン−５'−三リン酸塩、５―ブロモウリジン５'−三リン酸塩、５−ヨードシチジン−５'−三リン酸塩、５−ヨードウリジン−５'−三リン酸塩、５−メチルシチジン−５'−三リン酸塩、５メチルウリジン５'−三リン酸塩、６−アザシチジン５'−三リン酸塩、６―アザウリジン５'−三リン酸塩、６−クロロプリンリボシド−５'−三リン酸塩、７−デアザアデノシン５'−三リン酸塩、７−デアザグアノシン５'−三リン酸塩、８−アザアデノシン−５'−三リン酸塩、８−アジドアデノシン−５'−三リン酸塩、ベンズイミダゾール−リボシド５'−三リン酸塩、Ｎ１−メチルアデノシン−５'−三リン酸塩、Ｎ１−メチルグアノシン−５'−三リン酸塩、Ｎ６−メチルアデノシン−５'−三リン酸塩、Ｏ６−メチルグアノシン−５'−三リン酸塩、プソイドウリジン５'−三リン酸塩、プロマイシン５'−三リン酸塩、および、キサントシン５'−三リン酸塩からなる群より選択される塩基修飾の少なくとも１つを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
上記塩基修飾は、５−メチルシチジン−５'−三リン酸塩、７−デアザグアノシン５'−三リン酸塩、５−ブロモシチジン−５'−三リン酸塩、および、プソイドウリジン５'−三リン酸塩からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
上記塩基修飾されたｍＲＮＡが、骨格修飾および糖修飾を含んでいない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
上記塩基修飾されたｍＲＮＡが、少なくとも１つの骨格修飾および／または少なくとも１つの糖修飾を含んでいる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
上記塩基修飾されたｍＲＮＡが、該塩基修飾されたＲＮＡのコード領域内に、天然型のＲＮＡ配列のコード領域のＧ／Ｃ含量よりも多いＧ／Ｃ含量をさらに有しており、コードされるアミノ酸配列が野生型と比較して変更されていない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
ｔＲＮＡをコードする天然型のＲＮＡの少なくとも１つのコドンであって細胞内に比較的まれに存在するコドンが、細胞内に比較的多く存在しかつ該比較的まれに存在するｔＲＮＡと同一のアミノ酸を運ぶｔＲＮＡをコードするコドンの１つによって置換される様式にて、上記塩基修飾されたＲＮＡのコード領域が、天然型のＲＮＡのコード領域と比較して変更されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、ｍ７Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'（Ａ，Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）ＡおよびＧ（５'）ｐｐｐ（５'）Ｇからなる群より選択される５'−キャップ構造をさらに含んでいる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、少なくとも５０ヌクレオチドのポリＡテールを含んでいる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、少なくとも２０ヌクレオチドのポリＡテールを含んでいる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、ヘキサヒスチジンタグ（ＨＩＳタグ、ポリヒスチジンタグ）、ストレプトアビジンタグ（連鎖球菌タグ）、ＳＢＰタグ（ストレプトアビジン結合タグ）、またはＧＳＴ（グルタチオンＳ-トランスフェラーゼ）タグからなる群より選択される精製用のタグ、または、抗体結合タグ、Ｍｙｃタグ、Ｓｗａｌｌエピトープ、ＦＬＡＧタグ、およびＨＡタグからなる群より選択される抗体エピトープを介する精製用のタグをさらにコードする、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、脂質修飾を含んでいる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
腫瘍および癌疾患、心臓および循環器系統の病気、感染症、自己免疫疾患または単一遺伝子疾患からなる群より選択される疾患を処置するための薬学的組成物を調製するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の塩基修飾されたＲＮＡの使用。
【請求項１７】
上記薬学的組成物が、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン、またはスペルミジンを含むカチオン性ペプチドまたはポリペプチド；キトサン、ＴＤＭ、ＭＤＰ、ムラミルジペプチド、プルロニクス、アルム溶液、水酸化アルミニウム、ＡＤＪＵＭＥＲ（商標）（ポリホスファゼン）を含むカチオン性の多糖類；リン酸アルミニウムゲル；藻類由来のグルカン；アルガムリン；水酸化アルミニウムゲル（アルム）；高タンパク質吸着性水酸化アルミニウムゲル；低粘性酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアラン（５％）、Ｔｗｅｅｎ ８０（０．２％）、プルロニック Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝食塩水のエマルジョン、ｐＨ７．４）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ（商標）（プロパンジアミン）；ＢＡＹ Ｒ１００５（商標）（（Ｎ−（−２デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイル−アミドハイドロ酢酸塩）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ（商標）（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰＴＭ（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラホロトキシン、コレラ毒素−Ａ１−タンパク質−Ａ−Ｄ−フラグメント融解タンパク質、コレラ毒素のサブユニットＢ；ＣＲＬ １００５（ブロック共重合体Ｐ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウム臭化物）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／アルム複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ガンマイヌリン；ゲルブアジュバント（（ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル（Ｐ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−ＬアラニルＤ−グルタミン（ＧＭＤＰ）と、（ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウム塩化物（ＤＤＡ）と、（ｉｉｉ）亜鉛−Ｌ―プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８）との混合物；ＧＭ−ＣＳＦ）；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ（脱水−再水和小泡から調製された免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ（商標）（「Immune Stimulating Complexes」）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ ７．０．３．（商標）； リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ（商標）（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント（大腸菌の不安定なエンテロトキシンプロトキシン）；任意の組成のマイクロスフェアおよび微粒子；ＭＦ５９（商標）；（スクアレン水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ５１（商標）（精製不完全フロインドアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０（商標）（代謝可能なオイルアジュバント）；ＭＰＬ（商標）（３−Ｑ−デサシル−４’−モノホスホリルリピドＡ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ―アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシホスホリルオキシ））エチルアミド、モノナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ（商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（商標）およびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−ｉｓｏＧＩｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼガラクトースオキシダーゼ）；任意の組成のナノスフェアまたはナノ粒子；ＮＩＳＶ（非イオン界面活性剤小泡）；ＰＬＥＵＲＡＮ（商標）（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡ、およびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；マイクロ／ナノスフェア）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｌ１２１（商標）；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳ（商標）（プロテノイドマイクロスフェア）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポリ−ｒＡ：ポリ−ｒＵ（ポリアデニル酸のポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）；タンパク質コキエート（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．， Ａｌａｂａｓｔｅｒ， ＡＬ）；ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−ｏｔｅｃ−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１（商標）（「Syntex adjuvant formulation」）；センダイプロテオリポソームおよび脂質センダイマトリックス；Ｓｐａｎ−８５（ソルビタントリオレート）；スペコール（Ｍａｒｃｏｌ ５２、Ｓｐａｎ８５、およびＴｗｅｅｎ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサン、および２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシン塩酸塩）；Ｔｈｅｒａｍｉｄ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；Ｔｈｅｒｏｎｙｌ−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標）または［ｔｈｒ １］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ−Ｒｅｅｄリポソーム（水酸化アルミニウム上に吸着されたリピドＡを含むリポソーム）；Ｐａｍ３Ｃｙｓを含むリポペプチド；ＣｐＧおよび／またはＲＮＡオリゴヌクレオチドから選択された核酸系のアジュバント、または、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、またはＴＬＲ１３、またはそれらの相同体のリガンドから選択されたトール様受容体からなる群より選択されるアジュバントをさらに含んでいる、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
上記薬学的組成物がワクチンである、請求項１６または１７に記載の使用。
【請求項１９】
上記癌または腫瘍の疾患が、黒色腫、悪性黒色腫、結腸癌、リンパ腫、肉腫、芽腫、腎癌、胃腸腫瘍、神経膠腫、前立腺腫瘍、膀胱癌、直腸腫瘍、胃癌、食道癌、膵臓癌、肝癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘパトーム、ウイルスによって誘発される様々な腫瘍（例えば、乳頭腫ウイルスによって誘発される悪性腫瘍（例えば子宮頚癌）、悪性腺腫、ヘルペスウイルスによって誘発される腫瘍（例えばバーキットリンパ腫、ＥＢＶによって誘発されるＢ細胞リンパ腫）、Ｂ型肝炎によって誘発される腫瘍（肝細胞悪性腫瘍）、ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−２によって誘発されるリンパ腫等）、聴神経腫、肺癌（＝気管支癌）、小細胞肺癌、咽頭癌、肛門癌、グリア芽腫、直腸癌、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽腫、基底細胞腫、脳転移、髄芽腫、膣癌、膵臓癌、精巣癌、ホジキン症候群、髄膜腫、シュネーベルガー病、脳下垂体腫瘍、菌状息肉腫、カルチノイド、神経鞘腫、棘細胞腫、バーキットリンパ腫、喉頭癌、腎癌、胸腺腫、体癌、骨肉腫、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、ＣＵＰ症候群、頭頸部腫瘍、乏突起膠腫、外陰癌、腸癌、結腸癌、食道悪性腫瘍（＝食道癌）、いぼ合併症、小腸腫瘍、頭蓋咽頭腫、卵巣癌、生殖器腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、子宮内膜癌、肝転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、白血病、形質細胞腫、まぶた腫瘍、および、前立腺癌（＝前立腺腫瘍）からなる群より選択される、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
上記感染症が、インフルエンザ、マラリア、ＳＡＲＳ、黄熱、エイズ、ライムボレリア症、リーシュマニア症、炭疽病、髄膜炎、ウイルス感染症、細菌感染症、炭疽病、虫垂炎、ボレリア症、ボツリヌス中毒、カンフィローバクター、トラコーマクラミジア（尿道の炎症、結膜炎）、コレラ、ジフテリア、鼠径肉芽腫、喉頭蓋炎、発疹チフス、ガス壊疽、淋病、野兎病、ヘリコバクターピロリ、百日咳、鼠径リンパ肉芽腫、骨髄炎、レジオネラ症、ハンセン病、リステリア症、肺炎、髄膜炎、細菌性髄膜炎、炭疽病、中耳炎、マイコプラズマホミニス、新生児敗血症（絨毛羊膜炎）、水癌、パラチフス、ペスト、ライター症候群、ロッキー山紅斑熱、サルモネラ菌パラチフス、サルモネラ菌発疹チフス、猩紅熱、梅毒、破傷風、トリッパー、ツツガムシ病、結核、発疹チフス、膣炎、軟性下疳等、および寄生虫、原生動物、または菌によって発症する感染症、疥癬、皮膚のリーシュマニア症、ランブル鞭毛虫症、シラミ、マラリア、顕微鏡検査、糸状虫症（河川盲目症）、真菌症、ウシ条虫、住血吸虫病、睡眠病、ブタ条虫、トキソプラズマ症、トリコモナス症、トリパノソーマ症（睡眠病）、内臓性リーシュマニア症、おしめ／おむつ皮膚炎、または微小条虫によって引き起こされる感染症からなる群より選択され、
上記ウイルス感染症は、例えば、エイズ、尖圭コンジローマ、凹窩いぼ、デング熱、三日熱、エボラウイルス、風邪、初夏髄膜脳炎（ＦＳＭＥ）、インフルエンザ、帯状ヘルペス、肝炎、単純ヘルぺス Ｉ型、単純ヘルぺス ＩＩ型、帯状疱疹、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、マールブルグウイルス、麻疹、口蹄疫、単核症、流行性耳下腺炎、ノーウォークウイルス感染、プファイファー腺熱、疱瘡、ポリオ（幼年期 跛行）、仮性クループ、伝染性紅斑、狂犬病、いぼ、西ナイル熱、水痘、巨細胞ウイルス（ＣＭＶ）等であり、
上記細菌感染症は、例えば、流産（前立腺炎症）であり、
上記寄生虫、原生動物、または菌によって発症する感染症は、例えば、アメーバ症、ビルハルツ住血吸虫症、シャーガス病、エキノコックス属、広節裂頭条虫、魚類中毒症（シガテラ中毒）、キツネ条虫、みずむし、イヌ条虫、カンジダ症、酵母菌斑である、
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
上記心臓および循環器系統の病気が、冠動脈心疾患、動脈硬化、卒中、高血圧からなる群より選択され、神経細胞の疾患が、アルツハイマー病、筋萎縮側索硬化、ジストニー、てんかん、多発硬化、およびパーキンソン病から選択される、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
上記自己免疫疾患が、Ｉ型自己免疫疾患、ＩＩ型自己免疫疾患、ＩＩＩ型自己免疫疾患、またはＩＶ型自己免疫疾患からなる群より選択され、
上記自己免疫疾患が、例えば、多発硬化（ＭＳ）、関節リウマチ、糖尿病、Ｉ型糖尿病（真性糖尿病）、全身性エリテマートーデス（ＳＬＥ）、慢性多発関節炎、バセドウ氏病、自己免疫型慢性肝炎、潰瘍性大腸炎、Ｉ型アレルギー疾患、ＩＩ型アレルギー疾患、ＩＩＩ型アレルギー疾患、ＩＶ型アレルギー疾患、線維筋痛、脱毛症、ベヒテレフ病、クローン病、重症筋無力症、神経皮膚炎、リウマチ性多発筋痛、全身性進行性硬化（ＰＳＳ）、乾癬、ライター症候群、関節リウマチ、乾癬および脈管炎である、
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
上記単一遺伝子疾患が、アデノシンデアミナーゼ欠乏症、家族性高コレステロール血症、Ｃａｎａｖａｎ症候群、ゴーシェ病、ファンコニ貧血、神経セロイドリポフスチノーシス、ムコビシドーシス（嚢胞性線維症）、鎌状赤血球貧血、フェニルケトン尿症、アルカプトン尿症、白皮症、甲状腺機能低下不全症、ガラクトース血症、α１アンチトリプシン欠損症、色素性乾皮症、Ｒｉｂｂｉｎｇ症候群、ムコ多糖体症、唇裂、顎、口蓋、ローレンス・ムーン・バルデー・ビードル症候群、短肋骨多指症候群、クレチン病、ジュベール症候群、ＩＩ型早老症、短指症、副腎性器症候群のような常染色体劣性遺伝性疾患からなる群、および色覚異常、ぜい弱Ｘ症候群、筋ジストロフィ（デュシエンヌ型、Ｂｅｃｋｅｒ−Ｋｉｅｎｅｒ型）、血友病ＡおよびＢ、Ｇ６ＰＤ欠損症、ファブリー病、ムコ多糖体症、Ｎｏｒｒｉｅ症候群、色素性網膜炎、敗血性肉芽腫症、Ｘ−ＳＣＩＤ、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、レッシュ‐ナイハン症候群のようなＸ染色体遺伝性疾患からなる群、または、例えば遺伝性欠陥浮腫、マルファン症候群、神経線維腫症、Ｉ型早老症、骨形成不全症、クリッペル・トレノーネイ症候群、スタージ‐ウェーバー症候群、ヒッペル・リンダウ症候群、結節性硬化症のような常染色体優性遺伝性疾患より選択され、上記色覚異常は例えば赤緑色盲である、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の、塩基修飾されたＲＮＡ配列。
【請求項２５】
以下の工程（ａ）〜（ｄ）を含む、塩基修飾されたＲＮＡの調製のためのインビトロ転写法：
（ａ）目的のタンパク質をコードする（デオキシ）リボ核酸を調製する工程；
（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝液、核酸混合物、および必要に応じてリボヌクレアーゼ阻害剤を含むインビトロ転写媒質に上記核酸を添加する工程であって、該核酸混合物は、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、および／またはＵの代りとしての、請求項５に定義されている１つ以上の塩基修飾ヌクレオチドと、天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵの全てが置換されるわけではない場合、必要に応じて、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵとを含む、工程；
（ｃ）上記インビトロ転写媒質中にて上記核酸をインキュベートし、該核酸をインビトロ転写する工程；
（ｄ）必要に応じて、精製および組み込まれなかったヌクレオチドの上記インビトロ転写媒質からの除去を行う工程。
【請求項２６】
タンパク質の発現を増加させるためにインビトロで転写および翻訳を行う方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｇ）を包含する方法：
（ａ）目的のタンパク質をコードする（デオキシ）リボ核酸を調製する工程；
（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝液、核酸混合物、および必要に応じてリボヌクレアーゼ阻害剤を含むインビトロ転写媒質に上記核酸を添加する工程であって、該核酸混合物は、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、および／またはＵの代りとしての、請求項５に定義されている１つ以上の塩基修飾ヌクレオチドと、天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵの全てが置換されるわけではない場合、必要に応じて、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵとを含む、工程；
（ｃ）上記インビトロ転写媒質中にて上記核酸をインキュベートし、該核酸をインビトロ転写する工程；
（ｄ）必要に応じて、精製および組み込まれなかったヌクレオチドの上記インビトロ転写媒質からの除去を行う工程；
（ｅ）工程（ｃ）および必要に応じて工程（ｄ）において得られた塩基修飾された核酸を、インビトロ翻訳媒質に添加する工程；
（ｆ）上記インビトロ翻訳媒質中にて上記塩基修飾された核酸をインキュベートし、該塩基修飾された核酸によってコードされるタンパク質をインビトロ翻訳する工程；
（ｇ）必要に応じて、工程（ｆ）において翻訳されたタンパク質を精製する工程。
【請求項２７】
宿主細胞中におけるタンパク質の発現を増加させるためにインビトロで転写および翻訳を行う方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｇ'）を包含する方法：
（ａ）目的のタンパク質をコードする（デオキシ）リボ核酸を調製する工程；
（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝液、核酸混合物、および必要に応じてリボヌクレアーゼ阻害剤を含むインビトロ転写媒質に上記核酸を添加する工程であって、該核酸混合物は、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、および／またはＵの代りとしての、請求項５に定義されている１つ以上の塩基修飾ヌクレオチドと、天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵの全てが置換されるわけではない場合、必要に応じて、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵとを含む、工程；
（ｃ）上記インビトロ転写媒質中にて上記核酸をインキュベートし、該核酸をインビトロ転写する工程；
（ｄ）必要に応じて、精製および組み込まれなかったヌクレオチドの上記インビトロ転写媒質からの除去を行う工程；
（ｅ'）工程（ｃ）および必要に応じて工程（ｄ）において得られた塩基修飾された核酸を、宿主細胞にトランスフェクトする工程；
（ｆ'）上記宿主細胞中にて上記塩基修飾された核酸をインキュベートし、該塩基修飾された核酸によってコードされるタンパク質を翻訳する工程；
（ｇ'）必要に応じて、工程（ｆ）において翻訳されたタンパク質を単離および／または精製する工程。
【請求項２８】
以下の（ａ）〜（ｃ）の工程を包含する、エキソビボでの治療法：
（ａ）必要に応じて患者から細胞または組織を外植する工程；
（ｂ）培養された細胞／組織、または工程（ａ）で得られた細胞／組織を、請求項２４に記載の塩基修飾されたＲＮＡによってトランスフェクトする工程；
（ｃ）必要に応じて、工程（ｂ）においてトランスフェクトされた細胞を患者に移植する工程。
【請求項２９】
上記トランスフェクトされた細胞が抗原提示細胞（ＡＰＣ）である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
請求項２４に記載の塩基修飾されたＲＮＡ配列を含んでいる、ＲＮＡライブラリー。
【請求項３１】
細胞／組織転写物の一部を提示するサブトラクションライブラリーである、請求項３０に記載のＲＮＡライブラリー。
【請求項３２】
以下の工程（ａ）〜（ｃ）によって特徴付けられる方法より取得される、ＲＮＡライブラリー：
（ａ）任意の細胞または組織から、ｃＤＮＡライブラリーまたはその一部を作製／調製する工程；
（ｂ）上記ｃＤＮＡライブラリーまたはその一部を用いて、本発明に係る塩基修飾されたＲＮＡをインビトロ転写するためのマトリックスを作製／調製する工程；
（ｃ）上記マトリックスをインビトロ転写する工程。
【請求項１】
タンパク質の発現を増加させるための、塩基修飾されたＲＮＡ配列の使用であって、該塩基修飾されたＲＮＡ配列は、少なくとも１つの塩基修飾を含み、かつ少なくとも１つのタンパク質をコードする、使用。
【請求項２】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、一本鎖または二本鎖であり、線状または環状であり、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはｍＲＮＡの形態である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
上記塩基修飾されたＲＮＡがｍＲＮＡである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
上記塩基修飾されたＲＮＡは、組換えによって、または、天然に産生されるタンパク質の群より選択されるタンパク質の少なくとも１つをコードし、該タンパク質の群は、成長ホルモンまたは成長因子；代謝および／または造血に影響するタンパク質；血液凝固系のタンパク質；［ベータ］−ガラクトシダーゼ（ｌａｃＺ）；ＤＮＡ制限酵素；リゾチーム；プロテアーゼ；細胞の信号伝達を刺激するタンパク質；アポトーシス因子またはアポトーシスと関連または結合するタンパク質；腫瘍特異性表面抗原（ＴＳＳＡ）を含む抗原；ＮＹ−Ｅｓｏ−１またはＮＹ−Ｅｓｏ−Ｂを含む配列；上記タンパク質のうちの１つに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有するタンパク質またはタンパク質配列からなり、
上記成長ホルモンまたは成長因子は、ＴＧＦα、ＩＧＦ（インスリン様増殖因子）を含み、
上記代謝および／または造血に影響するタンパク質は、α−アンチトリプシン、ＬＤＬ受容体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インシュリン、ＧＡＴＡ−１を含み、
上記血液凝固系のタンパク質は、第８因子、第６因子等であり、
上記ＤＮＡ制限酵素は、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩを含み、
上記プロテアーゼは、パパイン、ブロメライン、ケラチナーゼ、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、レニン（キモシン）、Ｓｕｉｚｙｍｅ、Ｎｏｒｔａｓｅを含み、
上記細胞の信号伝達を刺激するタンパク質は、４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）と保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）とを含むクラスＩサイトカインファミリーのサイトカイン、４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）を含んでいるが保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）を含んでいないクラスＩＩサイトカインファミリー、腫瘍壊死ファミリーのサイトカイン、７つの膜貫通ヘリックスを含みかつＧ−タンパク質と相互作用するケモカインファミリーのサイトカインを含み、
上記４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）と保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）とを含むクラスＩサイトカインファミリーのサイトカインは、ＩＬ−３；ＩＬ−５；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２を含むＩＬ−６サブファミリー；ＩＬ−２、ＩＬ−４ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５を含むＩＬ−２サブファミリー；サイトカインＩＬ−１α；ＩＬ−１β；ＩＬ−１０を含み、
上記４つの位置特異的な保存システイン残基（ＣＣＣＣ）を含んでいるが保存配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）を含んでいないクラスＩＩサイトカインファミリー（インターフェロン受容体ファミリー）のサイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γを含み、
上記腫瘍壊死ファミリーのサイトカインは、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＣＤ４０、Ｆａｓを含み、
上記７つの膜貫通ヘリックスを含みかつＧ−タンパク質と相互作用するケモカインファミリーのサイトカインは、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１、ランテス、ＣＣＲ５、ＣＸＲ４を含み、
上記アポトーシス因子またはアポトーシスと関連または結合するタンパク質は、ＡＩＦ、Ａｐａｆ、ＡＰＯ−２（Ｌ）、ＡＰＯ−３（Ｌ）、アポパイン、Ｂａｄ、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ｘＳ、ｂｉｋ、ＣＡＤ、カルパイン、カスパーゼ、ｃｅｄ−３、ｃｅｄ−９、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ｃｒｍ Ａ、シトクロムＣ、ＣｄＲ１、ＤｃＲ１、ＤＤ、ＤＥＤ、ＤＩＳＣ、ＤＮＡ−ＰＫＣＳ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＦＡＤＤ／ＭＯＲＴ−１、ＦＡＫ、Ｆａｓ（ＦａｓリガンドＣＤ９５／ｆａｓ（受容体））、ＦＬＩＣＥ／ＭＡＣＨ、ＦＬＩＰ、ホドリン、ｆｏｓ、Ｇ―アクチン、ガス−２、ゲルゾリン、グランザイムＡ／Ｂ、ＩＣＡＤ、ＩＣＥ、ＪＮＫ、ラミンＡ／Ｂ、ＭＡＰ、ＭＣＬ−１、Ｍｄｍ−２、ＭＥＫＫ−１、ＭＯＲＴ−１、ＮＥＤＤ、ＮＦ−ｋＢ、ＮｕＭａ、ｐ５３、ＰＡＫ−２、ＰＡＲＰ、パーフォリン、ＰＩＴＳＬＲＥ、ＰＫＣσ、ｐＲｂ、プレセニリン、ｐｒＩＣＥ、ＲＡＩＤＤ、Ｒａｓ、ＲＩＰ、スフィンゴミエリナーゼ、単純ヘルぺス由来のチミジンキナーゼ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、トランスグルタミナーゼを含み、
上記Ａｐａｆは、例えばＡｐａｆ−１、Ａｐａｆ−２、Ａｐａｆ−３であり、
上記カスパーゼは、例えば、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１であり、
上記腫瘍特異性表面抗原（ＴＳＳＡ）を含む抗原は、５Ｔ４、α５β１−インテグリン、７０７−ＡＰ、ＡＦＰ、ＡＲＴ−４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、β−カテニン／ｍ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ ＩＸ抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン／ｍ、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ＣＴ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ−２／ｎｅｗ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＡＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、ミオシン／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＭ−１、−２、−３、ＮＡ８８−Ａ、ＰＡＰ、プロテイナーゼ−３、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ−ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、サバイビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１を含む、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
上記塩基修飾されたＲＮＡは、２−アミノ６−クロロプリンリボシド−５'−三リン酸塩、２−アミノアデノシン５'−三リン酸塩、２−チオシチジン−５'−三リン酸塩、２−チオウリジン５'−三リン酸塩、４−チオウリジン５'−三リン酸塩、５−アミノアリルシチジン−５'−三リン酸塩、５−アミノアリルウリジン−５'−三リン酸塩、５−ブロモシチジン−５'−三リン酸塩、５―ブロモウリジン５'−三リン酸塩、５−ヨードシチジン−５'−三リン酸塩、５−ヨードウリジン−５'−三リン酸塩、５−メチルシチジン−５'−三リン酸塩、５メチルウリジン５'−三リン酸塩、６−アザシチジン５'−三リン酸塩、６―アザウリジン５'−三リン酸塩、６−クロロプリンリボシド−５'−三リン酸塩、７−デアザアデノシン５'−三リン酸塩、７−デアザグアノシン５'−三リン酸塩、８−アザアデノシン−５'−三リン酸塩、８−アジドアデノシン−５'−三リン酸塩、ベンズイミダゾール−リボシド５'−三リン酸塩、Ｎ１−メチルアデノシン−５'−三リン酸塩、Ｎ１−メチルグアノシン−５'−三リン酸塩、Ｎ６−メチルアデノシン−５'−三リン酸塩、Ｏ６−メチルグアノシン−５'−三リン酸塩、プソイドウリジン５'−三リン酸塩、プロマイシン５'−三リン酸塩、および、キサントシン５'−三リン酸塩からなる群より選択される塩基修飾の少なくとも１つを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
上記塩基修飾は、５−メチルシチジン−５'−三リン酸塩、７−デアザグアノシン５'−三リン酸塩、５−ブロモシチジン−５'−三リン酸塩、および、プソイドウリジン５'−三リン酸塩からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
上記塩基修飾されたｍＲＮＡが、骨格修飾および糖修飾を含んでいない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
上記塩基修飾されたｍＲＮＡが、少なくとも１つの骨格修飾および／または少なくとも１つの糖修飾を含んでいる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
上記塩基修飾されたｍＲＮＡが、該塩基修飾されたＲＮＡのコード領域内に、天然型のＲＮＡ配列のコード領域のＧ／Ｃ含量よりも多いＧ／Ｃ含量をさらに有しており、コードされるアミノ酸配列が野生型と比較して変更されていない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
ｔＲＮＡをコードする天然型のＲＮＡの少なくとも１つのコドンであって細胞内に比較的まれに存在するコドンが、細胞内に比較的多く存在しかつ該比較的まれに存在するｔＲＮＡと同一のアミノ酸を運ぶｔＲＮＡをコードするコドンの１つによって置換される様式にて、上記塩基修飾されたＲＮＡのコード領域が、天然型のＲＮＡのコード領域と比較して変更されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、ｍ７Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'（Ａ，Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）ＡおよびＧ（５'）ｐｐｐ（５'）Ｇからなる群より選択される５'−キャップ構造をさらに含んでいる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、少なくとも５０ヌクレオチドのポリＡテールを含んでいる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、少なくとも２０ヌクレオチドのポリＡテールを含んでいる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、ヘキサヒスチジンタグ（ＨＩＳタグ、ポリヒスチジンタグ）、ストレプトアビジンタグ（連鎖球菌タグ）、ＳＢＰタグ（ストレプトアビジン結合タグ）、またはＧＳＴ（グルタチオンＳ-トランスフェラーゼ）タグからなる群より選択される精製用のタグ、または、抗体結合タグ、Ｍｙｃタグ、Ｓｗａｌｌエピトープ、ＦＬＡＧタグ、およびＨＡタグからなる群より選択される抗体エピトープを介する精製用のタグをさらにコードする、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
上記塩基修飾されたＲＮＡが、脂質修飾を含んでいる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
腫瘍および癌疾患、心臓および循環器系統の病気、感染症、自己免疫疾患または単一遺伝子疾患からなる群より選択される疾患を処置するための薬学的組成物を調製するための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の塩基修飾されたＲＮＡの使用。
【請求項１７】
上記薬学的組成物が、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン、またはスペルミジンを含むカチオン性ペプチドまたはポリペプチド；キトサン、ＴＤＭ、ＭＤＰ、ムラミルジペプチド、プルロニクス、アルム溶液、水酸化アルミニウム、ＡＤＪＵＭＥＲ（商標）（ポリホスファゼン）を含むカチオン性の多糖類；リン酸アルミニウムゲル；藻類由来のグルカン；アルガムリン；水酸化アルミニウムゲル（アルム）；高タンパク質吸着性水酸化アルミニウムゲル；低粘性酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアラン（５％）、Ｔｗｅｅｎ ８０（０．２％）、プルロニック Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝食塩水のエマルジョン、ｐＨ７．４）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ（商標）（プロパンジアミン）；ＢＡＹ Ｒ１００５（商標）（（Ｎ−（−２デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイル−アミドハイドロ酢酸塩）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ（商標）（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰＴＭ（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラホロトキシン、コレラ毒素−Ａ１−タンパク質−Ａ−Ｄ−フラグメント融解タンパク質、コレラ毒素のサブユニットＢ；ＣＲＬ １００５（ブロック共重合体Ｐ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウム臭化物）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／アルム複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ガンマイヌリン；ゲルブアジュバント（（ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル（Ｐ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−ＬアラニルＤ−グルタミン（ＧＭＤＰ）と、（ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウム塩化物（ＤＤＡ）と、（ｉｉｉ）亜鉛−Ｌ―プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８）との混合物；ＧＭ−ＣＳＦ）；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ（脱水−再水和小泡から調製された免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ（商標）（「Immune Stimulating Complexes」）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ ７．０．３．（商標）； リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ（商標）（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント（大腸菌の不安定なエンテロトキシンプロトキシン）；任意の組成のマイクロスフェアおよび微粒子；ＭＦ５９（商標）；（スクアレン水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ５１（商標）（精製不完全フロインドアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０（商標）（代謝可能なオイルアジュバント）；ＭＰＬ（商標）（３−Ｑ−デサシル−４’−モノホスホリルリピドＡ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ―アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシホスホリルオキシ））エチルアミド、モノナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ（商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（商標）およびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−ｉｓｏＧＩｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼガラクトースオキシダーゼ）；任意の組成のナノスフェアまたはナノ粒子；ＮＩＳＶ（非イオン界面活性剤小泡）；ＰＬＥＵＲＡＮ（商標）（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡ、およびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；マイクロ／ナノスフェア）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｌ１２１（商標）；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳ（商標）（プロテノイドマイクロスフェア）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポリ−ｒＡ：ポリ−ｒＵ（ポリアデニル酸のポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）；タンパク質コキエート（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．， Ａｌａｂａｓｔｅｒ， ＡＬ）；ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−ｏｔｅｃ−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］−キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１（商標）（「Syntex adjuvant formulation」）；センダイプロテオリポソームおよび脂質センダイマトリックス；Ｓｐａｎ−８５（ソルビタントリオレート）；スペコール（Ｍａｒｃｏｌ ５２、Ｓｐａｎ８５、およびＴｗｅｅｎ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサン、および２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシン塩酸塩）；Ｔｈｅｒａｍｉｄ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；Ｔｈｅｒｏｎｙｌ−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標）または［ｔｈｒ １］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ−Ｒｅｅｄリポソーム（水酸化アルミニウム上に吸着されたリピドＡを含むリポソーム）；Ｐａｍ３Ｃｙｓを含むリポペプチド；ＣｐＧおよび／またはＲＮＡオリゴヌクレオチドから選択された核酸系のアジュバント、または、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、またはＴＬＲ１３、またはそれらの相同体のリガンドから選択されたトール様受容体からなる群より選択されるアジュバントをさらに含んでいる、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
上記薬学的組成物がワクチンである、請求項１６または１７に記載の使用。
【請求項１９】
上記癌または腫瘍の疾患が、黒色腫、悪性黒色腫、結腸癌、リンパ腫、肉腫、芽腫、腎癌、胃腸腫瘍、神経膠腫、前立腺腫瘍、膀胱癌、直腸腫瘍、胃癌、食道癌、膵臓癌、肝癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘパトーム、ウイルスによって誘発される様々な腫瘍（例えば、乳頭腫ウイルスによって誘発される悪性腫瘍（例えば子宮頚癌）、悪性腺腫、ヘルペスウイルスによって誘発される腫瘍（例えばバーキットリンパ腫、ＥＢＶによって誘発されるＢ細胞リンパ腫）、Ｂ型肝炎によって誘発される腫瘍（肝細胞悪性腫瘍）、ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−２によって誘発されるリンパ腫等）、聴神経腫、肺癌（＝気管支癌）、小細胞肺癌、咽頭癌、肛門癌、グリア芽腫、直腸癌、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽腫、基底細胞腫、脳転移、髄芽腫、膣癌、膵臓癌、精巣癌、ホジキン症候群、髄膜腫、シュネーベルガー病、脳下垂体腫瘍、菌状息肉腫、カルチノイド、神経鞘腫、棘細胞腫、バーキットリンパ腫、喉頭癌、腎癌、胸腺腫、体癌、骨肉腫、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、ＣＵＰ症候群、頭頸部腫瘍、乏突起膠腫、外陰癌、腸癌、結腸癌、食道悪性腫瘍（＝食道癌）、いぼ合併症、小腸腫瘍、頭蓋咽頭腫、卵巣癌、生殖器腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、子宮内膜癌、肝転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、白血病、形質細胞腫、まぶた腫瘍、および、前立腺癌（＝前立腺腫瘍）からなる群より選択される、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
上記感染症が、インフルエンザ、マラリア、ＳＡＲＳ、黄熱、エイズ、ライムボレリア症、リーシュマニア症、炭疽病、髄膜炎、ウイルス感染症、細菌感染症、炭疽病、虫垂炎、ボレリア症、ボツリヌス中毒、カンフィローバクター、トラコーマクラミジア（尿道の炎症、結膜炎）、コレラ、ジフテリア、鼠径肉芽腫、喉頭蓋炎、発疹チフス、ガス壊疽、淋病、野兎病、ヘリコバクターピロリ、百日咳、鼠径リンパ肉芽腫、骨髄炎、レジオネラ症、ハンセン病、リステリア症、肺炎、髄膜炎、細菌性髄膜炎、炭疽病、中耳炎、マイコプラズマホミニス、新生児敗血症（絨毛羊膜炎）、水癌、パラチフス、ペスト、ライター症候群、ロッキー山紅斑熱、サルモネラ菌パラチフス、サルモネラ菌発疹チフス、猩紅熱、梅毒、破傷風、トリッパー、ツツガムシ病、結核、発疹チフス、膣炎、軟性下疳等、および寄生虫、原生動物、または菌によって発症する感染症、疥癬、皮膚のリーシュマニア症、ランブル鞭毛虫症、シラミ、マラリア、顕微鏡検査、糸状虫症（河川盲目症）、真菌症、ウシ条虫、住血吸虫病、睡眠病、ブタ条虫、トキソプラズマ症、トリコモナス症、トリパノソーマ症（睡眠病）、内臓性リーシュマニア症、おしめ／おむつ皮膚炎、または微小条虫によって引き起こされる感染症からなる群より選択され、
上記ウイルス感染症は、例えば、エイズ、尖圭コンジローマ、凹窩いぼ、デング熱、三日熱、エボラウイルス、風邪、初夏髄膜脳炎（ＦＳＭＥ）、インフルエンザ、帯状ヘルペス、肝炎、単純ヘルぺス Ｉ型、単純ヘルぺス ＩＩ型、帯状疱疹、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、マールブルグウイルス、麻疹、口蹄疫、単核症、流行性耳下腺炎、ノーウォークウイルス感染、プファイファー腺熱、疱瘡、ポリオ（幼年期 跛行）、仮性クループ、伝染性紅斑、狂犬病、いぼ、西ナイル熱、水痘、巨細胞ウイルス（ＣＭＶ）等であり、
上記細菌感染症は、例えば、流産（前立腺炎症）であり、
上記寄生虫、原生動物、または菌によって発症する感染症は、例えば、アメーバ症、ビルハルツ住血吸虫症、シャーガス病、エキノコックス属、広節裂頭条虫、魚類中毒症（シガテラ中毒）、キツネ条虫、みずむし、イヌ条虫、カンジダ症、酵母菌斑である、
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
上記心臓および循環器系統の病気が、冠動脈心疾患、動脈硬化、卒中、高血圧からなる群より選択され、神経細胞の疾患が、アルツハイマー病、筋萎縮側索硬化、ジストニー、てんかん、多発硬化、およびパーキンソン病から選択される、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
上記自己免疫疾患が、Ｉ型自己免疫疾患、ＩＩ型自己免疫疾患、ＩＩＩ型自己免疫疾患、またはＩＶ型自己免疫疾患からなる群より選択され、
上記自己免疫疾患が、例えば、多発硬化（ＭＳ）、関節リウマチ、糖尿病、Ｉ型糖尿病（真性糖尿病）、全身性エリテマートーデス（ＳＬＥ）、慢性多発関節炎、バセドウ氏病、自己免疫型慢性肝炎、潰瘍性大腸炎、Ｉ型アレルギー疾患、ＩＩ型アレルギー疾患、ＩＩＩ型アレルギー疾患、ＩＶ型アレルギー疾患、線維筋痛、脱毛症、ベヒテレフ病、クローン病、重症筋無力症、神経皮膚炎、リウマチ性多発筋痛、全身性進行性硬化（ＰＳＳ）、乾癬、ライター症候群、関節リウマチ、乾癬および脈管炎である、
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
上記単一遺伝子疾患が、アデノシンデアミナーゼ欠乏症、家族性高コレステロール血症、Ｃａｎａｖａｎ症候群、ゴーシェ病、ファンコニ貧血、神経セロイドリポフスチノーシス、ムコビシドーシス（嚢胞性線維症）、鎌状赤血球貧血、フェニルケトン尿症、アルカプトン尿症、白皮症、甲状腺機能低下不全症、ガラクトース血症、α１アンチトリプシン欠損症、色素性乾皮症、Ｒｉｂｂｉｎｇ症候群、ムコ多糖体症、唇裂、顎、口蓋、ローレンス・ムーン・バルデー・ビードル症候群、短肋骨多指症候群、クレチン病、ジュベール症候群、ＩＩ型早老症、短指症、副腎性器症候群のような常染色体劣性遺伝性疾患からなる群、および色覚異常、ぜい弱Ｘ症候群、筋ジストロフィ（デュシエンヌ型、Ｂｅｃｋｅｒ−Ｋｉｅｎｅｒ型）、血友病ＡおよびＢ、Ｇ６ＰＤ欠損症、ファブリー病、ムコ多糖体症、Ｎｏｒｒｉｅ症候群、色素性網膜炎、敗血性肉芽腫症、Ｘ−ＳＣＩＤ、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、レッシュ‐ナイハン症候群のようなＸ染色体遺伝性疾患からなる群、または、例えば遺伝性欠陥浮腫、マルファン症候群、神経線維腫症、Ｉ型早老症、骨形成不全症、クリッペル・トレノーネイ症候群、スタージ‐ウェーバー症候群、ヒッペル・リンダウ症候群、結節性硬化症のような常染色体優性遺伝性疾患より選択され、上記色覚異常は例えば赤緑色盲である、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の、塩基修飾されたＲＮＡ配列。
【請求項２５】
以下の工程（ａ）〜（ｄ）を含む、塩基修飾されたＲＮＡの調製のためのインビトロ転写法：
（ａ）目的のタンパク質をコードする（デオキシ）リボ核酸を調製する工程；
（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝液、核酸混合物、および必要に応じてリボヌクレアーゼ阻害剤を含むインビトロ転写媒質に上記核酸を添加する工程であって、該核酸混合物は、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、および／またはＵの代りとしての、請求項５に定義されている１つ以上の塩基修飾ヌクレオチドと、天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵの全てが置換されるわけではない場合、必要に応じて、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵとを含む、工程；
（ｃ）上記インビトロ転写媒質中にて上記核酸をインキュベートし、該核酸をインビトロ転写する工程；
（ｄ）必要に応じて、精製および組み込まれなかったヌクレオチドの上記インビトロ転写媒質からの除去を行う工程。
【請求項２６】
タンパク質の発現を増加させるためにインビトロで転写および翻訳を行う方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｇ）を包含する方法：
（ａ）目的のタンパク質をコードする（デオキシ）リボ核酸を調製する工程；
（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝液、核酸混合物、および必要に応じてリボヌクレアーゼ阻害剤を含むインビトロ転写媒質に上記核酸を添加する工程であって、該核酸混合物は、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、および／またはＵの代りとしての、請求項５に定義されている１つ以上の塩基修飾ヌクレオチドと、天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵの全てが置換されるわけではない場合、必要に応じて、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵとを含む、工程；
（ｃ）上記インビトロ転写媒質中にて上記核酸をインキュベートし、該核酸をインビトロ転写する工程；
（ｄ）必要に応じて、精製および組み込まれなかったヌクレオチドの上記インビトロ転写媒質からの除去を行う工程；
（ｅ）工程（ｃ）および必要に応じて工程（ｄ）において得られた塩基修飾された核酸を、インビトロ翻訳媒質に添加する工程；
（ｆ）上記インビトロ翻訳媒質中にて上記塩基修飾された核酸をインキュベートし、該塩基修飾された核酸によってコードされるタンパク質をインビトロ翻訳する工程；
（ｇ）必要に応じて、工程（ｆ）において翻訳されたタンパク質を精製する工程。
【請求項２７】
宿主細胞中におけるタンパク質の発現を増加させるためにインビトロで転写および翻訳を行う方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｇ'）を包含する方法：
（ａ）目的のタンパク質をコードする（デオキシ）リボ核酸を調製する工程；
（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、緩衝液、核酸混合物、および必要に応じてリボヌクレアーゼ阻害剤を含むインビトロ転写媒質に上記核酸を添加する工程であって、該核酸混合物は、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、および／またはＵの代りとしての、請求項５に定義されている１つ以上の塩基修飾ヌクレオチドと、天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵの全てが置換されるわけではない場合、必要に応じて、１つ以上の天然型のヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｃ、またはＵとを含む、工程；
（ｃ）上記インビトロ転写媒質中にて上記核酸をインキュベートし、該核酸をインビトロ転写する工程；
（ｄ）必要に応じて、精製および組み込まれなかったヌクレオチドの上記インビトロ転写媒質からの除去を行う工程；
（ｅ'）工程（ｃ）および必要に応じて工程（ｄ）において得られた塩基修飾された核酸を、宿主細胞にトランスフェクトする工程；
（ｆ'）上記宿主細胞中にて上記塩基修飾された核酸をインキュベートし、該塩基修飾された核酸によってコードされるタンパク質を翻訳する工程；
（ｇ'）必要に応じて、工程（ｆ）において翻訳されたタンパク質を単離および／または精製する工程。
【請求項２８】
以下の（ａ）〜（ｃ）の工程を包含する、エキソビボでの治療法：
（ａ）必要に応じて患者から細胞または組織を外植する工程；
（ｂ）培養された細胞／組織、または工程（ａ）で得られた細胞／組織を、請求項２４に記載の塩基修飾されたＲＮＡによってトランスフェクトする工程；
（ｃ）必要に応じて、工程（ｂ）においてトランスフェクトされた細胞を患者に移植する工程。
【請求項２９】
上記トランスフェクトされた細胞が抗原提示細胞（ＡＰＣ）である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
請求項２４に記載の塩基修飾されたＲＮＡ配列を含んでいる、ＲＮＡライブラリー。
【請求項３１】
細胞／組織転写物の一部を提示するサブトラクションライブラリーである、請求項３０に記載のＲＮＡライブラリー。
【請求項３２】
以下の工程（ａ）〜（ｃ）によって特徴付けられる方法より取得される、ＲＮＡライブラリー：
（ａ）任意の細胞または組織から、ｃＤＮＡライブラリーまたはその一部を作製／調製する工程；
（ｂ）上記ｃＤＮＡライブラリーまたはその一部を用いて、本発明に係る塩基修飾されたＲＮＡをインビトロ転写するためのマトリックスを作製／調製する工程；
（ｃ）上記マトリックスをインビトロ転写する工程。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１０−５０８０１４（Ｐ２０１０−５０８０１４Ａ）
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３３７５５（Ｐ２００９−５３３７５５）
【出願日】平成１９年１０月３１日（２００７．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００９４６９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５２７７０
【国際公開日】平成２０年５月８日（２００８．５．８）
【出願人】（５０９０１４３８６）キュアバック ゲーエムベーハー (11)
【氏名又は名称原語表記】ＣＵＲＥＶＡＣ ＧＭＢＨ
【住所又は居所原語表記】Ｐａｕｌ−Ｅｈｒｌｉｃｈ−Ｓｔｒ．１５，７２０７６ Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月３１日（２００７．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００９４６９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５２７７０
【国際公開日】平成２０年５月８日（２００８．５．８）
【出願人】（５０９０１４３８６）キュアバック ゲーエムベーハー (11)
【氏名又は名称原語表記】ＣＵＲＥＶＡＣ ＧＭＢＨ
【住所又は居所原語表記】Ｐａｕｌ−Ｅｈｒｌｉｃｈ−Ｓｔｒ．１５，７２０７６ Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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